月を盗んで世界一の怪盗の名声を手に入れたグルーは、怪盗から足を洗い、娘として迎えた孤児三姉妹マーゴ、イディス、アグネス、相棒ネファリオ博士、そしていたずら好きな黄色い軍団ミニオンたちと一緒に楽しく暮らしていた。
しかし、そんな平穏な日々も、長続きはしなかった。
ある日、グルーは反悪党同盟の捜査官と名乗る美女、ルーシーに同盟本部に連れていかれる。
その幹部から、極秘研究所で開発された突然変異を起こすＰＸ41という薬が何者かに盗まれたことを聞かされ、盗んだ犯人を突き止めるよう依頼される。時を同じくして、ネファリオ博士、そしてミニオンたちが、何者かの手によって誘拐されてしまったのだ！一見、全く役に立たないミニオンたちがなぜ？最強の仲間・ミニオンたちを助け出すために怪盗グルーとその娘たちが立ち上がる！

グルー：笑福亭鶴瓶 ／スティーヴ・カレル

ルーシー：中島美嘉 ／ クリスティン・ウィグ

エドアルド（エル・マッチョ）：中井貴一／ ベンジャミン・ブラット

マーゴ：須藤祐実 ／ ミランダ・コスグローブ

ネファリオ博士：伊井篤史 ／ ラッセル・ブランド

フロイド：山寺宏一／ケン・チョン

アグネス：芦田愛菜 ／ エルシー・フィッシャー

イディス：矢島晶子 ／ ダナ・ガイアー

アントニオ：宮野真守 ／モイーズ・アライアス

監督：クリス・ルノー／ピエール・コフィン

脚本：シンコ・ポール＆ケン・ダウリオ